犬皰疹病毒PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品名稱(chēng)：犬皰疹病毒PCR檢測試劑盒

英文名稱(chēng)：Canine Herpes Virus PCR

準備物品：

清理液（A）                                   毫升

染色液（t B）                                 微升

稀釋液（C）                                   毫升

溶解液（tD）                                  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                     1份

注意事項：

1．基礎程序.

2．擴增溫度和延伸溫度.

3．反應時(shí)間.

4．循環(huán)次數.

5．PCR 反應液的配制.

6．PCR技術(shù)的基本原理.

7．PCR的反應動(dòng)力學(xué).

8．PCR擴增產(chǎn)物.

9．PCR反應體系與反應條件。

反應五要素：

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，犬皰疹病毒PCR檢測試劑盒PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長(cháng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長(cháng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會(huì )形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數第二個(gè)堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好，引物濃度偏高會(huì )引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會(huì )。